Preparo do corante de carregamento de DNA
Este guia descreve o preparo de um corante de carregamento para DNA em uma molaridade definida para uso em laboratório.
O corante de carregamento de DNA é usado para acompanhar a migração do DNA em géis de agarose ou poliacrilamida.
Corante de carregamento de DNA 6X – Composição
| Nome | Fórmula | Concentração | CAS |
|---|---|---|---|
| Tris-Cl (pH 7.6) | C₄H₁₁NO₃ | 10 mM | 77-86-1 |
| EDTA | C₁₀H₁₆N₂O₈ | 60 mM | 60-00-4 |
| Laranja G | C₁₆H₁₀N₂Na₂O₇S₂ | 0.4% (w/v) | 1936-15-8 |
| Azul de bromofenol | C₁₉H₁₀Br₄O₅S | 0.25% (w/v) | 115-39-9 |
| Xileno cianol FF | C₂₅H₂₇N₂NaO₆S₂ | 0.25% (w/v) | 2650-17-1 |
| Ficoll 400 | (C₁₂H₂₂O₁₁)n·(C₃H₅ClO)n | 15% (w/v) | 26873-85-8 |
Esterilização e armazenamento
- Esterilização: não é necessária.
- Armazenamento: dividir em alíquotas em tubos de 1 mL; 4 °C ou −20 °C.
Dicas
- Existem muitas formulações de corante de carregamento de DNA; apenas um exemplo é apresentado aqui.
- Antes de adicionar os corantes (até a etapa 4), a solução pode parecer incolor a amarelada e turva.
- Ao preparar volumes pequenos (por exemplo, 10 mL), garantir que não restem resíduos de solução nas paredes ou na tampa do tubo antes de ajustar o volume.
- Usar um recipiente adequado e realizar todo o procedimento em um único recipiente, se possível, pois a solução é viscosa e difícil de pipetar.
- As concentrações dos corantes podem ser ajustadas: azul de bromofenol e xileno cianol FF 0.03%–0.50% (w/v); laranja G 0.15%–0.50% (w/v).
- Concentrações altas de corantes melhoram o contraste visual, mas podem ocultar bandas de DNA que comigram; usar concentrações mais baixas quando forem esperados fragmentos de DNA comigrantes.
- O Ficoll 400 pode ser substituído por glicerol a 60% (v/v) ou sacarose a 40% (w/v); as soluções de sacarose devem ser congeladas.
- Os corantes de carregamento com Ficoll ajudam o DNA a afundar na agarose de forma mais eficaz, mas são mais caros.
- Os corantes de carregamento de três cores indicam melhor a resolução dos fragmentos de DNA, mas são mais caros.
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