Preparo do tampão TAE
Este guia descreve o preparo de um tampão Tris-acetato-EDTA em uma molaridade definida para uso em laboratório.
O tampão Tris-acetato-EDTA (TAE) é muito usado em eletroforese para análise de ácidos nucleicos, proporcionando pH estável e quelação eficaz de íons metálicos divalentes.
Tampão Tris-acetato-EDTA (TAE) – Composição da solução de trabalho 1X
| Nome | Fórmula | Concentração (1X) | CAS |
|---|---|---|---|
| Tris base | C₄H₁₁NO₃ | 40 mM | 77-86-1 |
| Ácido acético | CH₃CO₂H | 20 mM | 64-19-7 |
| EDTA | C₁₀H₁₆N₂O₈ | 1 mM | 60-00-4 |
Aplicações do tampão Tris-acetato-EDTA (TAE)
O tampão TAE é amplamente usado na eletroforese de DNA e RNA em gel de agarose. O Tris fornece capacidade tamponante, o ácido acético ajusta a força iônica e o pH, e o EDTA quela cátions divalentes, como Mg²⁺, inibindo a atividade de nucleases. O tampão TAE oferece boa resolução de fragmentos grandes de DNA e é comumente usado em clonagem, análise de restrição e separação rotineira de ácidos nucleicos.
Dicas de preparo, esterilização e armazenamento
- Recomenda-se usar uma solução de EDTA ou EDTA·2Na·2H₂O.
- Alguns estudos mostraram que tampões preparados com EDTA (ácido livre) geram menos calor durante a eletroforese, mas exigem mais tempo de preparo.
- O EDTA (ácido livre) é extremamente difícil de dissolver e requer pH 8.0. Recomenda-se preparar primeiro uma solução estoque de EDTA.
- A concentração molar do ácido acético glacial (ácido acético a 100%) é de aproximadamente 17.5 M.
- Se houver uma pequena quantidade de precipitado, ela pode ser redissolvida colocando a solução em banho-maria a 37°C, sem prejudicar o uso. Se o precipitado persistir após o tratamento, descarte a solução.
- Esterilização: geralmente desnecessária; escolher conforme a necessidade.
- Armazenamento: temperatura ambiente.
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