Preparo do tampão TBE
Este guia descreve o preparo de um tampão Tris-borato-EDTA em uma molaridade definida para uso em laboratório.
O tampão Tris-borato-EDTA (TBE) é muito usado em eletroforese para análise de ácidos nucleicos, sendo especialmente adequado à separação de fragmentos pequenos de DNA.
Tampão Tris-borato-EDTA (TBE) – Composição da solução de trabalho 1X
| Nome | Fórmula | Concentração (1X) | CAS |
|---|---|---|---|
| Tris base | C₄H₁₁NO₃ | 89 mM | 77-86-1 |
| Borato | H₃BO₃ | 89 mM | 10043-35-3 |
| EDTA | C₁₀H₁₆N₂O₈ | 2 mM | 60-00-4 |
Aplicações do tampão Tris-borato-EDTA (TBE)
O tampão TBE é amplamente usado na eletroforese de DNA em géis de agarose e poliacrilamida. Em comparação com o TAE, oferece maior capacidade tamponante e pH mais estável durante corridas prolongadas. Proporciona melhor resolução de fragmentos pequenos de DNA e é comumente usado na determinação de tamanho do DNA, análise de fragmentos de restrição e eletroforese de alta resolução.
Dicas de preparo, esterilização e armazenamento
- Recomenda-se usar uma solução de EDTA ou EDTA·2Na·2H₂O.
- Alguns estudos mostraram que tampões preparados com EDTA (ácido livre) geram menos calor durante a eletroforese, mas exigem mais tempo de preparo.
- O EDTA (ácido livre) é extremamente difícil de dissolver. Recomenda-se preparar primeiro uma solução estoque de EDTA.
- Se houver uma pequena quantidade de precipitado, ela pode ser redissolvida colocando a solução em banho-maria a 37°C, sem prejudicar o uso. Se o precipitado persistir após o tratamento, descarte a solução.
- Esterilização: geralmente desnecessária; escolher conforme a necessidade.
- Armazenamento: temperatura ambiente.
Prévia
