Herstellung des Puffers TBE
Diese Anleitung beschreibt die Herstellung eines Tris-Borat-EDTA-Puffers mit einer festgelegten Molarität für den Laborgebrauch.
Tris-Borat-EDTA-Puffer (TBE) ist ein häufig verwendeter Elektrophoresepuffer für die Nukleinsäureanalyse und eignet sich besonders zur Trennung kleiner DNA-Fragmente.
Tris-Borat-EDTA-Puffer (TBE) – Zusammensetzung der 1X-Arbeitslösung
| Name | Formel | Konzentration (1X) | CAS |
|---|---|---|---|
| Tris-Base | C₄H₁₁NO₃ | 89 mM | 77-86-1 |
| Borat | H₃BO₃ | 89 mM | 10043-35-3 |
| EDTA | C₁₀H₁₆N₂O₈ | 2 mM | 60-00-4 |
Anwendungen von Tris-Borat-EDTA-Puffer (TBE)
TBE-Puffer wird vielfach für die Agarose- und Polyacrylamidgelelektrophorese von DNA eingesetzt. Im Vergleich zu TAE bietet TBE eine höhere Pufferkapazität und einen stabileren pH-Wert bei langen Elektrophoreseläufen. Er ermöglicht eine bessere Auflösung kleiner DNA-Fragmente und wird häufig zur DNA-Größenbestimmung, Restriktionsfragmentanalyse und hochauflösenden Elektrophorese verwendet.
Hinweise zur Herstellung, Sterilisation und Lagerung
- Die Verwendung einer EDTA-Lösung oder von EDTA·2Na·2H₂O wird empfohlen.
- Einige Studien haben gezeigt, dass mit EDTA (freier Säure) hergestellte Puffer während der Elektrophorese weniger Wärme erzeugen, jedoch eine längere Herstellungszeit erfordern.
- EDTA (freie Säure) ist äußerst schwer löslich. Es wird empfohlen, zunächst eine EDTA-Stammlösung herzustellen.
- Bildet sich eine geringe Menge Niederschlag, kann dieser in einem Wasserbad bei 37°C wieder gelöst werden, ohne die Verwendung zu beeinträchtigen. Bleibt nach der Wasserbadbehandlung Niederschlag zurück, ist die Lösung zu verwerfen.
- Sterilisation: meist nicht erforderlich; je nach Bedarf wählen.
- Lagerung: Raumtemperatur.
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