Herstellung einer Tris-Cl-Stammlösung

Anleitung zur Herstellung einer Stammlösung – Tris-Puffer (1 M, pH 7.2)

Tris (Tris(hydroxymethyl)aminomethan), auch Trizma oder THAM genannt, ist ein in der Molekularbiologie und Biochemie weit verbreiteter biologischer Puffer. Sein pKa beträgt ~8.08 bei 25 °C und sein wirksamer Pufferbereich reicht von ~7.2 bis 9.0, wodurch er für Anwendungen bei physiologischem pH geeignet ist. Der pH der Lösung ist temperaturabhängig und sollte bei der vorgesehenen Verwendungstemperatur eingestellt werden.

Chemische Angaben

Anwendungen

• Allgemeine biologische Pufferung im pH-Bereich 7.2–9.0
• Herstellung von TAE-, TBE- und TE-Puffern

Löslichkeit und Handhabung

• Tris-Base ist ein weißes Pulver, das sich leicht in Wasser löst.
• Da sich der pH mit der Temperatur ändert, den pH bei der Temperatur einstellen, bei der der Puffer verwendet wird.

Herstellung von 1 M Tris.Cl (pH 7.2)

1. 121.14 g Tris-Base einwiegen und in ein Becherglas oder einen Kolben mit 1 L Fassungsvermögen überführen.
2. ~800 mL deionisiertes Wasser zugeben und unter Rühren lösen.
3. Falls die Lösung erwärmt wurde, auf Raumtemperatur abkühlen lassen. Den pH nicht im heißen Zustand einstellen.
4. Konzentrierte HCl langsam unter Rühren und pH-Kontrolle zugeben. Die Lösung vor der abschließenden Einstellung auf pH 7.2 wieder auf die vorgesehene Temperatur für die pH-Einstellung bringen lassen. Die HCl-Menge anhand des gemessenen pH-Werts bestimmen, nicht anhand eines festen Volumens.
5. In einen 1 L-Messzylinder überführen und das Endvolumen mit deionisiertem Wasser auf 1000 mL einstellen.
6. Optional: Falls ein steriler Puffer benötigt wird, 20 min bei 15 psi autoklavieren.

Lagerung und Hinweise

• 1 M Tris.Cl bei pH 7.2 ist klar und farblos; bei Gelbfärbung verwerfen.
• Mehrere Wochen bei Raumtemperatur lagern.