Preparación del tampón TAE
Esta guía describe la preparación de un tampón Tris-acetato-EDTA a una molaridad definida para uso en laboratorio.
El tampón Tris-acetato-EDTA (TAE) se utiliza habitualmente en electroforesis para el análisis de ácidos nucleicos y proporciona un pH estable y una quelación eficaz de iones metálicos divalentes.
Tampón Tris-acetato-EDTA (TAE) – Composición de la solución de trabajo 1X
| Nombre | Fórmula | Concentración (1X) | CAS |
|---|---|---|---|
| Tris base | C₄H₁₁NO₃ | 40 mM | 77-86-1 |
| Ácido acético | CH₃CO₂H | 20 mM | 64-19-7 |
| EDTA | C₁₀H₁₆N₂O₈ | 1 mM | 60-00-4 |
Aplicaciones del tampón Tris-acetato-EDTA (TAE)
El tampón TAE se utiliza ampliamente para la electroforesis de ADN y ARN en gel de agarosa. Tris proporciona capacidad tamponante, el ácido acético ajusta la fuerza iónica y el pH, y el EDTA quela cationes divalentes como Mg²⁺, inhibiendo la actividad de las nucleasas. El tampón TAE ofrece buena resolución para fragmentos grandes de ADN y se utiliza habitualmente en clonación, análisis de restricción y separación rutinaria de ácidos nucleicos.
Consejos de preparación, esterilización y conservación
- Se recomienda utilizar una solución de EDTA o EDTA·2Na·2H₂O.
- Algunos estudios han mostrado que los tampones preparados con EDTA (ácido libre) generan menos calor durante la electroforesis, pero requieren más tiempo de preparación.
- El EDTA (ácido libre) es extremadamente difícil de disolver y requiere un pH de 8.0. Se recomienda preparar primero una solución madre de EDTA.
- La concentración molar del ácido acético glacial (ácido acético al 100%) es aproximadamente 17.5 M.
- Si se forma una pequeña cantidad de precipitado, puede redisolverse colocando la solución en un baño de agua a 37°C, sin afectar a su uso. Si persiste el precipitado después del tratamiento, desechar la solución.
- Esterilización: normalmente no es necesaria; elegir según las necesidades.
- Conservación: temperatura ambiente.
