Preparación del colorante de carga de ADN
Esta guía describe la preparación de un colorante de carga para ADN a una molaridad definida para uso en laboratorio.
El colorante de carga de ADN se utiliza para seguir la migración del ADN en geles de agarosa o poliacrilamida.
Colorante de carga de ADN 6X – Composición
| Nombre | Fórmula | Concentración | CAS |
|---|---|---|---|
| Tris-Cl (pH 7.6) | C₄H₁₁NO₃ | 10 mM | 77-86-1 |
| EDTA | C₁₀H₁₆N₂O₈ | 60 mM | 60-00-4 |
| Naranja G | C₁₆H₁₀N₂Na₂O₇S₂ | 0.4% (w/v) | 1936-15-8 |
| Azul de bromofenol | C₁₉H₁₀Br₄O₅S | 0.25% (w/v) | 115-39-9 |
| Cianol de xileno FF | C₂₅H₂₇N₂NaO₆S₂ | 0.25% (w/v) | 2650-17-1 |
| Ficoll 400 | (C₁₂H₂₂O₁₁)n·(C₃H₅ClO)n | 15% (w/v) | 26873-85-8 |
Esterilización y almacenamiento
- Esterilización: no es necesaria.
- Almacenamiento: dividir en alícuotas en tubos de 1 mL; 4 °C o −20 °C.
Consejos
- Existen muchas formulaciones de colorante de carga de ADN; aquí solo se presenta un ejemplo.
- Antes de añadir los colorantes (hasta el paso 4), la solución puede parecer incolora a amarillenta y turbia.
- Al preparar volúmenes pequeños (p. ej., 10 mL), asegurarse de que no queden restos de solución en las paredes o la tapa del tubo antes de ajustar el volumen.
- Utilizar un recipiente adecuado y completar el procedimiento en un único recipiente si es posible, ya que la solución es viscosa y difícil de pipetear.
- Las concentraciones de colorantes pueden ajustarse: azul de bromofenol y cianol de xileno FF 0.03%–0.50% (w/v); naranja G 0.15%–0.50% (w/v).
- Las concentraciones altas de colorantes mejoran el contraste visual, pero pueden ocultar bandas de ADN que comigran; utilizar concentraciones más bajas cuando se esperen fragmentos de ADN comigrantes.
- Ficoll 400 puede sustituirse por glicerol al 60% (v/v) o sacarosa al 40% (w/v); las soluciones de sacarosa deben congelarse.
- Los colorantes de carga con Ficoll ayudan a que el ADN se hunda en la agarosa con mayor eficacia, pero son más costosos.
- Los colorantes de carga de tres colores indican mejor la resolución de los fragmentos de ADN, pero son más caros.
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