Herstellung des Puffers HBSS
Diese Anleitung beschreibt die Herstellung einer ausgewogenen Salzlösung nach Hank (HBSS) mit einer festgelegten Molarität für den Laborgebrauch.
Hanks ausgewogene Salzlösung (HBSS) ist ein ausgewogener Salzpuffer, der in der Zellbiologie häufig eingesetzt wird, um beim Waschen, Transport und kurzfristigen Erhalt von Zellen und Geweben den physiologischen osmotischen Druck und pH-Wert aufrechtzuerhalten. Sie liefert Wasser und die für die Zellviabilität erforderlichen essenziellen anorganischen Ionen.
Hanks ausgewogene Salzlösung – Zusammensetzung
| Name | Formel | Konzentration | CAS |
|---|---|---|---|
| Natriumchlorid | NaCl | 0.8% (w/v) | 7647‑14‑5 |
| Kaliumchlorid | KCl | 0.04% (w/v) | 7447‑40‑7 |
| Kaliumdihydrogenphosphat | KH₂PO₄ | 0.006% (w/v) | 7778‑77‑0 |
| Natriumhydrogencarbonat | NaHCO₃ | 0.035% (w/v) | 144‑55‑8 |
| Glucose | C₆H₁₂O₆ | 0.1% (w/v) | 50‑99‑7 |
| Dinatriumhydrogenphosphat | Na₂HPO₄ | 338.12 µM | 7778‑77‑0 |
| Calciumchlorid (optional) | CaCl₂ | 1.26144 mM | 10035‑04‑8 |
| Magnesiumsulfat (optional) | MgSO₄ | 406.5 µM | 10034‑99‑8 |
| Magnesiumchlorid (optional) | MgCl₂ | 492.6 µM | 7786‑30‑3 |
| Phenolrot (optional) | C₁₉H₁₄O₅S | 0.001% (w/v) | 143‑74‑8 |
Sterilisation und Lagerung
- Sterilisation: Filtration mit 0.22 μm zur Entfernung von Mikroorganismen (wegen des Glucosegehalts nicht autoklavieren).
- Lagerung: Raumtemperatur (vor Licht schützen).
Hinweise und Anmerkungen
- Durch Zugabe von 20 mM HEPES entsteht HHBS-Puffer.
- Diese Lösung enthält Glucose und darf nicht autoklaviert werden.
- Durch Calciumionen kann es zu Ausfällungen kommen. Im Wasserbad erwärmen, bis sich das Präzipitat auflöst; bei übermäßiger Präzipitatbildung die Lösung verwerfen.
- Aufgrund des niedrigen NaHCO₃-Gehalts ist diese Lösung nicht für eine Inkubatorumgebung mit 5% CO₂ geeignet; unter CO₂ wird sie rasch sauer.
- Mg²⁺ kann durch Magnesiumsulfat allein (0.098 g/L) oder in Kombination mit Magnesiumchlorid bereitgestellt werden; entsprechend auswählen.
- Wasserfreies Magnesiumsulfat und wasserfreies Calciumchlorid sind stark hygroskopisch und schwer einzuwiegen; ihre Verwendung wird nicht empfohlen.
- Wasserfreies Calciumchlorid setzt bei Kontakt mit Wasser Wärme frei; vorsichtig handhaben.
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