Preparación del tampón HBSS
Esta guía describe la preparación de una solución salina equilibrada de Hank (HBSS) a una molaridad definida para uso en laboratorio.
La solución salina equilibrada de Hank (HBSS) es un tampón salino equilibrado ampliamente utilizado en biología celular para mantener la presión osmótica y el pH fisiológicos durante el lavado, transporte y mantenimiento a corto plazo de células y tejidos. Proporciona agua e iones inorgánicos esenciales para la viabilidad celular.
Solución salina equilibrada de Hank – Composición
| Nombre | Fórmula | Concentración | CAS |
|---|---|---|---|
| Cloruro de sodio | NaCl | 0.8% (w/v) | 7647‑14‑5 |
| Cloruro de potasio | KCl | 0.04% (w/v) | 7447‑40‑7 |
| Fosfato monopotásico | KH₂PO₄ | 0.006% (w/v) | 7778‑77‑0 |
| Bicarbonato de sodio | NaHCO₃ | 0.035% (w/v) | 144‑55‑8 |
| Glucosa | C₆H₁₂O₆ | 0.1% (w/v) | 50‑99‑7 |
| Fosfato disódico | Na₂HPO₄ | 338.12 µM | 7778‑77‑0 |
| Cloruro de calcio (opcional) | CaCl₂ | 1.26144 mM | 10035‑04‑8 |
| Sulfato de magnesio (opcional) | MgSO₄ | 406.5 µM | 10034‑99‑8 |
| Cloruro de magnesio (opcional) | MgCl₂ | 492.6 µM | 7786‑30‑3 |
| Rojo de fenol (opcional) | C₁₉H₁₄O₅S | 0.001% (w/v) | 143‑74‑8 |
Esterilización y almacenamiento
- Esterilización: filtración de 0.22 μm para eliminar microorganismos (no autoclavar debido al contenido de glucosa).
- Almacenamiento: temperatura ambiente (proteger de la luz).
Consejos y notas
- La adición de 20 mM de HEPES produce el tampón HHBS.
- Esta solución contiene glucosa y no debe autoclavarse.
- Puede producirse precipitación debido a los iones calcio. Calentar en un baño de agua hasta que se disuelva el precipitado; si se forma una cantidad excesiva, desechar la solución.
- Debido al bajo contenido de NaHCO₃, esta solución no es adecuada para un incubador con 5% de CO₂; se acidificará rápidamente bajo CO₂.
- El Mg²⁺ puede aportarse mediante sulfato de magnesio solo (0.098 g/L) o combinado con cloruro de magnesio; elegir según corresponda.
- El sulfato de magnesio anhidro y el cloruro de calcio anhidro son muy higroscópicos y difíciles de pesar; no se recomienda su uso.
- El cloruro de calcio anhidro libera calor al entrar en contacto con el agua; manipular con cuidado.
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