Préparation du tampon HBSS
Ce guide décrit la préparation d'une solution saline équilibrée de Hank (HBSS) à une molarité définie pour une utilisation en laboratoire.
La solution saline équilibrée de Hank (HBSS) est un tampon salin équilibré largement utilisé en biologie cellulaire pour maintenir une pression osmotique et un pH physiologiques pendant le lavage, le transport et le maintien à court terme des cellules et des tissus. Elle fournit l’eau et les ions inorganiques essentiels à la viabilité cellulaire.
Solution saline équilibrée de Hank – Composition
| Nom | Formule | Concentration | CAS |
|---|---|---|---|
| Chlorure de sodium | NaCl | 0.8% (w/v) | 7647‑14‑5 |
| Chlorure de potassium | KCl | 0.04% (w/v) | 7447‑40‑7 |
| Phosphate monopotassique | KH₂PO₄ | 0.006% (w/v) | 7778‑77‑0 |
| Bicarbonate de sodium | NaHCO₃ | 0.035% (w/v) | 144‑55‑8 |
| Glucose | C₆H₁₂O₆ | 0.1% (w/v) | 50‑99‑7 |
| Phosphate disodique | Na₂HPO₄ | 338.12 µM | 7778‑77‑0 |
| Chlorure de calcium (facultatif) | CaCl₂ | 1.26144 mM | 10035‑04‑8 |
| Sulfate de magnésium (facultatif) | MgSO₄ | 406.5 µM | 10034‑99‑8 |
| Chlorure de magnésium (facultatif) | MgCl₂ | 492.6 µM | 7786‑30‑3 |
| Rouge de phénol (facultatif) | C₁₉H₁₄O₅S | 0.001% (w/v) | 143‑74‑8 |
Stérilisation et conservation
- Stérilisation : filtration à 0.22 μm pour éliminer les microorganismes (ne pas autoclaver en raison de la présence de glucose).
- Conservation : température ambiante (à l’abri de la lumière).
Conseils et remarques
- L’ajout de 20 mM d’HEPES donne le tampon HHBS.
- Cette solution contient du glucose et ne doit pas être autoclavée.
- Une précipitation peut se produire en raison des ions calcium. Réchauffer au bain-marie jusqu’à dissolution du précipité ; si la précipitation est excessive, jeter la solution.
- En raison de sa faible teneur en NaHCO₃, cette solution ne convient pas à un incubateur à 5% de CO₂ ; elle s’acidifie rapidement sous CO₂.
- Le Mg²⁺ peut être apporté par du sulfate de magnésium seul (0.098 g/L) ou associé à du chlorure de magnésium ; choisir selon les besoins.
- Le sulfate de magnésium anhydre et le chlorure de calcium anhydre sont très hygroscopiques et difficiles à peser ; leur utilisation n’est pas recommandée.
- Le chlorure de calcium anhydre dégage de la chaleur au contact de l’eau ; manipuler avec précaution.
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