Preparo do tampão HBSS
Este guia descreve o preparo de uma solução salina balanceada de Hank (HBSS) em uma molaridade definida para uso em laboratório.
A solução salina balanceada de Hank (HBSS) é um tampão salino balanceado amplamente usado em biologia celular para manter a pressão osmótica e o pH fisiológicos durante a lavagem, o transporte e a manutenção de curto prazo de células e tecidos. Fornece água e íons inorgânicos essenciais para a viabilidade celular.
Solução salina balanceada de Hank – Composição
| Nome | Fórmula | Concentração | CAS |
|---|---|---|---|
| Cloreto de sódio | NaCl | 0.8% (w/v) | 7647‑14‑5 |
| Cloreto de potássio | KCl | 0.04% (w/v) | 7447‑40‑7 |
| Fosfato monopotássico | KH₂PO₄ | 0.006% (w/v) | 7778‑77‑0 |
| Bicarbonato de sódio | NaHCO₃ | 0.035% (w/v) | 144‑55‑8 |
| Glicose | C₆H₁₂O₆ | 0.1% (w/v) | 50‑99‑7 |
| Fosfato dissódico | Na₂HPO₄ | 338.12 µM | 7778‑77‑0 |
| Cloreto de cálcio (opcional) | CaCl₂ | 1.26144 mM | 10035‑04‑8 |
| Sulfato de magnésio (opcional) | MgSO₄ | 406.5 µM | 10034‑99‑8 |
| Cloreto de magnésio (opcional) | MgCl₂ | 492.6 µM | 7786‑30‑3 |
| Vermelho de fenol (opcional) | C₁₉H₁₄O₅S | 0.001% (w/v) | 143‑74‑8 |
Esterilização e armazenamento
- Esterilização: filtração de 0.22 μm para remover microrganismos (não autoclavar devido ao conteúdo de glicose).
- Armazenamento: temperatura ambiente (proteger da luz).
Dicas e observações
- A adição de 20 mM de HEPES resulta no tampão HHBS.
- Esta solução contém glicose e não deve ser autoclavada.
- Pode ocorrer precipitação devido aos íons cálcio. Aquecer em banho-maria até o precipitado se dissolver; se houver precipitação excessiva, descartar a solução.
- Devido ao baixo teor de NaHCO₃, esta solução não é adequada para uso em incubadora com 5% de CO₂; ela se tornará ácida rapidamente sob CO₂.
- O Mg²⁺ pode ser fornecido por sulfato de magnésio isolado (0.098 g/L) ou em combinação com cloreto de magnésio; escolher conforme apropriado.
- O sulfato de magnésio anidro e o cloreto de cálcio anidro são altamente higroscópicos e difíceis de pesar; seu uso não é recomendado.
- O cloreto de cálcio anidro libera calor ao entrar em contato com a água; manusear com cuidado.
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