Herstellung von Lösung I für die Plasmidisolierung
Diese Anleitung beschreibt die Herstellung von Lösung I (Plasmidisolierung) mit einer festgelegten Molarität für den Laborgebrauch.
Lösung I wird bei der Plasmidisolierung verwendet, um Bakterienzellen zu resuspendieren und die Plasmid-DNA vor der alkalischen Lyse zu schützen.
Lösung I (Plasmidisolierung) – Zusammensetzung
| Name | Formel | Konzentration | CAS |
|---|---|---|---|
| Tris-Cl (pH 8.0) | C₄H₁₁NO₃ | 25 mM | 77-86-1 |
| EDTA | C₁₀H₁₆N₂O₈ | 10 mM | 60-00-4 |
| Glucose (optional) | C₆H₁₂O₆ | 50 mM | 50-99-7 |
| RNase A (vor Gebrauch zugeben) | N/A | 0.01% (w/v) | 9001-99-4 |
Funktion von Lösung I
Lösung I dient zur Resuspension geernteter Bakterienzellen. Tris-Cl hält den pH-Wert stabil, EDTA chelatiert zweiwertige Kationen zur Hemmung von DNasen, Glucose erhält den osmotischen Druck und RNase A entfernt RNA-Verunreinigungen.
Hinweise zur Herstellung, Sterilisation und Lagerung
- Glucose ist in Lösung I optional; wird jedoch Lysozym zugesetzt, muss Glucose enthalten sein.
- Glucosehaltige Puffer sind anfällig für Bakterienwachstum; sachgerecht lagern und vor Gebrauch sorgfältig prüfen.
- Die Aktivität von RNase A nimmt in Lösung mit der Zeit ab; RNase-A-haltige Puffer sollten bei 4°C gelagert und innerhalb eines Monats verwendet werden.
- RNase A kann unmittelbar vor Gebrauch separat bis zu einer Endkonzentration von 100 μg/mL zugesetzt werden.
- Sterilisation: Ohne Glucose kann die Lösung autoklaviert werden; andernfalls Tris-Cl, EDTA und Glucose vor dem Mischen getrennt sterilisieren.
- Lagerung: 4°C.
- Die meisten kommerziellen Formulierungen von Lösung I enthalten keine Glucose und verwenden üblicherweise 50 mM Tris-Cl.
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