Solution Iはプラスミド抽出で、アルカリ溶解前に菌体を再懸濁しプラスミドDNAを保護するために使用されます。
Solution I（プラスミド抽出）— 組成
| 名称 | 化学式 | 濃度 | CAS |
|---|---|---|---|
| Tris-Cl (pH 8.0) | C₄H₁₁NO₃ | 25 mM | 77-86-1 |
| EDTA | C₁₀H₁₆N₂O₈ | 10 mM | 60-00-4 |
| グルコース（任意） | C₆H₁₂O₆ | 50 mM | 50-99-7 |
| RNase A（使用直前に添加） | N/A | 0.01% (w/v) | 9001-99-4 |
Solution Iの役割
Solution Iは回収した菌体の再懸濁に使用されます。Tris-ClはpHを安定化し、EDTAは二価カチオンをキレートして DNaseを阻害します。グルコースは浸透圧を維持し、RNase AはRNA汚染を除去します。
調製のポイント、滅菌、保存
- Solution Iではグルコースは任意ですが、リゾチームを添加する場合はグルコースが必要です。
- グルコースを含むバッファーは細菌増殖しやすいため、適切に保存し使用前に確認してください。
- RNase A活性は溶液中で時間とともに低下します。RNase Aを含むバッファーは4°Cで保存し、1か月以内に使用してください。
- RNase Aは使用直前に最終濃度100 μg/mLになるよう別添加しても構いません。
- 滅菌：グルコースを含まない場合はオートクレーブ可。含む場合はTris-Cl、EDTA、グルコースをそれぞれ別に滅菌してから混合します。
- 保存：4°C。
- 市販のSolution Iは多くがグルコースを含まず、通常50 mM Tris-Clが用いられます。
Preview
