Préparation de la solution I pour l'isolement de plasmides
Ce guide décrit la préparation de la solution I (isolement de plasmides) à une molarité définie pour une utilisation en laboratoire.
La solution I est utilisée dans les protocoles d'isolement des plasmides pour remettre les cellules bactériennes en suspension et protéger l'ADN plasmidique avant la lyse alcaline.
Solution I (isolement des plasmides) – Composition
| Nom | Formule | Concentration | CAS |
|---|---|---|---|
| Tris-Cl (pH 8.0) | C₄H₁₁NO₃ | 25 mM | 77-86-1 |
| EDTA | C₁₀H₁₆N₂O₈ | 10 mM | 60-00-4 |
| Glucose (facultatif) | C₆H₁₂O₆ | 50 mM | 50-99-7 |
| RNase A (ajouter avant utilisation) | N/A | 0.01% (w/v) | 9001-99-4 |
Rôle de la solution I
La solution I sert à remettre en suspension les cellules bactériennes récoltées. Le Tris-Cl maintient un pH stable, l'EDTA chélate les cations divalents pour inhiber les DNases, le glucose maintient la pression osmotique et la RNase A élimine les contaminants ARN.
Conseils de préparation, stérilisation et conservation
- Le glucose est facultatif dans la solution I ; toutefois, si du lysozyme est ajouté, le glucose doit être inclus.
- Les tampons contenant du glucose favorisent la croissance bactérienne ; les conserver correctement et les inspecter attentivement avant utilisation.
- L'activité de la RNase A diminue avec le temps en solution ; les tampons contenant de la RNase A doivent être conservés à 4°C et utilisés dans un délai d'un mois.
- La RNase A peut être ajoutée séparément juste avant utilisation, à une concentration finale de 100 μg/mL.
- Stérilisation : sans glucose, la solution peut être autoclavée ; sinon, stériliser séparément le Tris-Cl, l'EDTA et le glucose avant de les mélanger.
- Conservation : 4°C.
- La plupart des formulations commerciales de solution I ne contiennent pas de glucose et utilisent généralement du Tris-Cl à 50 mM.
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