Preparo do tampão PCR à base de cloreto de potássio
Este guia descreve o preparo de um tampão de PCR à base de cloreto de potássio em uma molaridade definida para uso em laboratório.
O tampão de PCR à base de cloreto de potássio é comumente usado para otimizar a atividade da DNA polimerase.
Tampão de PCR à base de cloreto de potássio – Composição
| Nome | Fórmula | Concentração | CAS |
|---|---|---|---|
| Tris-Cl (pH 9.0) | C₄H₁₁NO₃ | 10 mM | 77-86-1 |
| Cloreto de potássio | KCl | 50 mM | 7447-40-7 |
| Cloreto de magnésio | MgCl₂ | 1.5 mM | 7791-18-6 |
| Triton X-100 | C₃₄H₆₂O₁₁ | 0.1% (w/v) | 9002-93-1 |
Esterilização e armazenamento
- Esterilização: filtração de 0.22 μm.
- Armazenamento: dividir em alíquotas e armazenar a −20 °C.
Dicas
- O pH do tampão geralmente é de 8.0–9.5, ajustado com Tris-Cl.
- O Triton X-100 é muito viscoso; usar uma solução estoque de baixa concentração ou substituí-lo por Tween 20.
- Ao usar tampão de PCR à base de KCl, o MgCl₂ geralmente está em concentração mais baixa (~1.5 ± 0.25 mM).
- O tampão de PCR ideal depende da DNA polimerase; seguir as recomendações do fornecedor da enzima.
- O uso direto de MgCl₂ anidro gera calor; adicionar em pequenas porções a uma parte do volume de solvente.
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