Preparación del tampón PCR con cloruro de potasio
Esta guía describe la preparación de un tampón de PCR a base de cloruro de potasio a una molaridad definida para uso en laboratorio.
El tampón de PCR a base de cloruro de potasio se utiliza habitualmente para optimizar la actividad de la ADN polimerasa.
Tampón de PCR a base de cloruro de potasio – Composición
| Nombre | Fórmula | Concentración | CAS |
|---|---|---|---|
| Tris-Cl (pH 9.0) | C₄H₁₁NO₃ | 10 mM | 77-86-1 |
| Cloruro de potasio | KCl | 50 mM | 7447-40-7 |
| Cloruro de magnesio | MgCl₂ | 1.5 mM | 7791-18-6 |
| Triton X-100 | C₃₄H₆₂O₁₁ | 0.1% (w/v) | 9002-93-1 |
Esterilización y almacenamiento
- Esterilización: filtración de 0.22 μm.
- Almacenamiento: dividir en alícuotas y almacenar a −20 °C.
Consejos
- El pH del tampón suele ser de 8.0–9.5, ajustado con Tris-Cl.
- Triton X-100 es muy viscoso; utilizar una solución madre de baja concentración o sustituirlo por Tween 20.
- Cuando se utiliza un tampón de PCR a base de KCl, el MgCl₂ suele estar a una concentración menor (~1.5 ± 0.25 mM).
- El tampón de PCR óptimo depende de la ADN polimerasa; seguir las recomendaciones del proveedor de la enzima.
- El uso directo de MgCl₂ anhidro genera calor; añadir en pequeñas porciones a una parte del volumen de disolvente.
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