Préparation d'une solution mère de HEPES
Ce guide décrit la préparation d'une solution mère de HEPES à une molarité définie pour une utilisation en laboratoire.
Guide de préparation des solutions mères – Tampon HEPES
L’HEPES (acide 4-(2-hydroxyéthyl)pipérazine-1-éthanesulfonique) est un tampon de Good zwitterionique largement utilisé en biologie cellulaire et en recherche biochimique. Son pKa est d’environ 7.5 à 25 °C et il assure un tamponnage efficace entre pH 6.8 et 8.2, ce qui le rend adapté aux applications à pH physiologique. L’HEPES lie peu les ions métalliques et est très soluble dans l’eau.
Informations chimiques
| Nom | Formule moléculaire | Masse molaire | CAS |
|---|---|---|---|
| HEPES (acide libre) | C₈H₁₈N₂O₄S | 238.30 g/mol | 7365-45-9 |
| HEPES·Na | C₈H₁₇N₂O₄S·Na | 260.29 g/mol | 75277-39-3 |
| HEPES·0.5Na | C₈H₁₇.₅N₂O₄S·0.5Na | 249.30 g/mol | 103404-87-1 |
Applications
- Tampon biologique en culture cellulaire et dans les dosages biochimiques
- Maintien du pH physiologique en solution
- Utilisé dans les dosages enzymatiques et l’électrophorèse
Préparation d’une solution mère d’HEPES à 1 M (pH ~7.5)
Voici une procédure type pour préparer une solution mère de tampon HEPES à 1 M :
- Peser 238.30 g d’HEPES (acide libre).
- Ajouter à ~800 mL d’eau déionisée dans un récipient adapté et commencer à agiter.
- À l’aide d’un pH-mètre étalonné, ajouter lentement une base forte (p. ex., NaOH à 10 N) en agitant jusqu’au pH souhaité (p. ex., ~7.5). Surveiller attentivement.
- Après ajustement du pH, transférer dans une éprouvette graduée de 1 L et ajouter de l’eau déionisée jusqu’à un volume final de 1 L.
- Pour les applications stériles, stériliser éventuellement par filtration sur un filtre de 0.22 µm.
Manipulation et conservation
- Les solutions mères d’HEPES sont limpides et incolores. Conserver à 4 °C ou à température ambiante pour de courtes durées.
- Préparer le tampon de travail en diluant la solution mère à la concentration souhaitée (p. ex., 10–25 mM).
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