Préparation d'une solution mère de DTT

Guide de préparation des solutions mères – DTT (dithiothréitol)

Le dithiothréitol (DTT), aussi appelé réactif de Cleland, est un agent réducteur couramment utilisé en biochimie des protéines. Il réduit les ponts disulfure (–S–S–), stabilise les enzymes et protège les groupes thiol fonctionnels des protéines. Les solutions mères aqueuses doivent de préférence être préparées extemporanément en raison de leur sensibilité à l’oxydation.

Informations chimiques

Nom	Formule moléculaire	Masse molaire	CAS
DTT (DL-dithiothréitol)	C₄H₁₀O₂S₂	154.25 g/mol	3483-12-3

Applications

Réduction des ponts disulfure des protéines
Stabilisation des enzymes
Préparation d’échantillons pour SDS-PAGE et Western blot

Solubilité et manipulation

Le DTT est un solide cristallin blanc très soluble dans l’eau, formant des solutions limpides.
Préparer les solutions mères dans de l’eau exempte de nucléases ; l’oxydation à l’air réduit l’activité au fil du temps.
Éviter l’autoclavage des solutions de DTT, car la chaleur dégrade l’agent réducteur.

Préparation de la solution mère

Pour préparer une solution mère de DTT à 1 M, calculer la masse nécessaire à partir de la masse molaire :

Masse nécessaire (g) = Masse molaire × Volume (L) × Concentration (mol/L)
Pour 10 mL de solution à 1 M : 154.25 × 0.010 × 1 = 1.54 g

Peser 1.54 g de poudre de DTT.
Transférer dans un tube propre et ajouter ~8–9 mL d’eau exempte de nucléases.
Mélanger jusqu’à dissolution complète.
Ajuster le volume à 10 mL avec de l’eau exempte de nucléases.
Si nécessaire, stériliser avec un filtre de 0.22 µm.
Répartir en aliquotes à usage unique et conserver à −20 °C.

Conservation et stabilité

Conserver le DTT solide au sec à 2–8 °C pour une stabilité à long terme.
Il est préférable de conserver les solutions mères à −20 °C en aliquotes pour limiter l’oxydation.
Le DTT en solution aqueuse est sujet à l’oxydation ; préparer des solutions de travail fraîches pour les expériences critiques.