DTT ストック溶液の調製

ストック溶液調製ガイド — DTT（Dithiothreitol）

Dithiothreitol（DTT、Cleland試薬）は、タンパク質生化学で広く使われる還元剤です。 ジスルフィド結合（–S–S–）を還元し、酵素活性の安定化やタンパク質中のチオール基保護に用いられます。 水溶液は酸化を受けやすいため、ストックは新鮮調製が推奨されます。

化学情報

用途

• タンパク質ジスルフィド結合の還元
• 酵素の安定化
• SDS-PAGE / Western blot 用サンプル調製

溶解性と取り扱い

• DTTは白色結晶で、水に高い溶解性を示し、透明溶液を形成します。
• ストックはヌクレアーゼフリー水で調製してください。空気酸化により活性は時間とともに低下します。
• DTT溶液は加熱で分解するため、オートクレーブ滅菌は避けてください。

ストック溶液の調製

1 M DTTストックを調製する場合、必要質量は分子量から以下で計算できます：

1. DTT粉末 1.54 g を秤量します。
2. 清潔なチューブへ移し、ヌクレアーゼフリー水を約8–9 mL加えます。
3. 完全に溶解するまで混和します。
4. ヌクレアーゼフリー水で最終体積を10 mLに調整します。
5. 必要に応じて0.22 µmフィルターで滅菌ろ過します。
6. 使い切り量で分注し、−20 °Cで保存します。

保存と安定性

• 固体DTTは乾燥状態で2–8 °C保存すると長期安定性が高まります。
• 溶液ストックは酸化を最小化するため、分注して−20 °C保存が推奨です。
• DTT水溶液は酸化しやすいため、重要実験では作業液を都度新規調製してください。