Preparo de solução estoque de DTT

Guia de preparo de soluções estoque – DTT (ditiotreitol)

O ditiotreitol (DTT), também conhecido como reagente de Cleland, é um agente redutor comumente usado em bioquímica de proteínas. Reduz ligações dissulfeto (–S–S–), estabiliza enzimas e protege os grupos tiol funcionais das proteínas. As soluções estoque aquosas devem preferencialmente ser preparadas no momento do uso devido à suscetibilidade à oxidação.

Informações químicas

Nome	Fórmula molecular	Massa molar	CAS
DTT (DL-ditiotreitol)	C₄H₁₀O₂S₂	154.25 g/mol	3483-12-3

Aplicações

Redução de ligações dissulfeto de proteínas
Estabilização de enzimas
Preparo de amostras para SDS-PAGE e Western blot

Solubilidade e manuseio

O DTT é um sólido cristalino branco altamente solúvel em água, formando soluções límpidas.
Prepare as soluções estoque em água livre de nucleases; a oxidação pelo ar reduz a atividade ao longo do tempo.
Evite autoclavar soluções de DTT, pois o calor degrada o agente redutor.

Preparo da solução estoque

Para preparar uma solução estoque de DTT a 1 M, calcule a massa necessária a partir da massa molar:

Massa necessária (g) = Massa molar × Volume (L) × Concentração (mol/L)
Para 10 mL de solução a 1 M: 154.25 × 0.010 × 1 = 1.54 g

Pese 1.54 g de DTT em pó.
Transfira para um tubo limpo e adicione ~8–9 mL de água livre de nucleases.
Misture até dissolver completamente.
Ajuste o volume para 10 mL com água livre de nucleases.
Se necessário, esterilize com um filtro de 0.22 µm.
Distribua em alíquotas de uso único e armazene a −20 °C.

Armazenamento e estabilidade

Armazene o DTT sólido dessecado a 2–8 °C para estabilidade a longo prazo.
As soluções estoque devem preferencialmente ser armazenadas em alíquotas a −20 °C para minimizar a oxidação.
O DTT aquoso é propenso à oxidação; prepare soluções de trabalho frescas para experimentos críticos.