Preparo de solução estoque de ortovanadato de sódio

Guia de preparo de solução estoque – Ortovanadato de sódio (Na₃VO₄) a 0.2 M

O ortovanadato de sódio (Na₃VO₄) é amplamente usado em experimentos bioquímicos como **inibidor de fosfatases** e geralmente é preparado como **solução estoque de 200 mM (0.2 M)**. Para maximizar a atividade inibitória, a solução deve ser ativada (despolimerizada) por ajustes repetidos de pH e fervura, de modo que permaneça incolor e estável em pH 10.

Objetivo

Preparo de **20 mL de solução estoque de ortovanadato de sódio a 0.2 M** para uso em tampões de lise celular ou ensaios enzimáticos.

Composição

• Ortovanadato de sódio (Na₃VO₄) em água deionizada/Milli‑Q a 0.2 M (200 mM)

Materiais necessários

• Ortovanadato de sódio (Na₃VO₄) sólido
• Ácido clorídrico (HCl) a 6 M ou HCl a 1 M
• Água deionizada / Milli‑Q
• Tubo de 50 mL com tampa de rosca para dissolução e mistura; recipiente com ventilação para liberar a pressão, resistente ao calor e aprovado pelo fabricante para o método de aquecimento selecionado
• Micro-ondas ou banho de água fervente
• Medidor de pH ou fitas capazes de medir pH 10
• Pipetas volumétricas/micropipetas
• EPI (luvas, óculos, jaleco)

Procedimento

• Etapa 1
  Pesar **0.736 g** de ortovanadato de sódio (massa molecular = 183.91) em um tubo de 50 mL com tampa de rosca. Adicionar **15 mL** de água deionizada/Milli‑Q e misturar por inversão até dissolver (≈ 5 min).
• Etapa 2
  Ajustar o pH da solução para **10.0** com HCl a 6 M (adicionar gota a gota ~10 µL por vez, misturando). O pH antes do ajuste pode ser ~13.5 e a solução pode ficar amarela ao adicionar ácido.
• Etapa 3
  Antes de aquecer, verificar se o recipiente é adequado para o método de aquecimento selecionado e se sua tampa foi removida ou afrouxada para permitir a liberação de pressão; transferir a solução para um recipiente adequado, se necessário. Não aquecer um tubo bem fechado. Aquecer em banho de água fervente até que a solução fique incolor e, em seguida, deixar esfriar até a temperatura ambiente. Usar aquecimento por micro-ondas somente com um recipiente explicitamente aprovado para esse uso e um procedimento laboratorial validado.
• Etapa 4
  Após resfriar, reajustar o pH para **10.0** e repetir o ciclo de fervura/resfriamento. Realizar **2–3 ciclos** até que a solução permaneça incolor e estável em pH 10 após resfriar.
• Etapa 5
  Ajustar o volume final para **20 mL** com água deionizada/Milli‑Q e misturar por inversão.

Nota: Os ciclos repetidos de ajuste de pH e fervura eliminam as espécies poliméricas de vanadato, resultando em uma solução estoque de ortovanadato ativa e incolor. Rotular as alíquotas com a concentração e a data de ativação e armazenar a **–20 °C** em pequenos volumes (por exemplo, 0.5–1 mL). Descartar se a cor reaparecer ou o pH mudar.

Reagentes disponíveis