Herstellung einer Natriumorthovanadat-Stammlösung

Anleitung zur Herstellung einer Stammlösung – 0.2 M Natriumorthovanadatlösung (Na₃VO₄)

Natriumorthovanadat (Na₃VO₄) wird häufig in biochemischen Experimenten als **Phosphataseinhibitor** eingesetzt und üblicherweise als **200 mM (0.2 M) Stammlösung** hergestellt. Für maximale Hemmaktivität muss die Lösung durch wiederholte pH-Einstellung und Aufkochen aktiviert (depolymerisiert) werden, sodass sie bei pH 10 farblos und stabil bleibt.

Ziel

Herstellung von **20 mL einer 0.2 M Natriumorthovanadat-Stammlösung** zur Verwendung in Zelllysepuffern oder Enzymassays.

Zusammensetzung

• Natriumorthovanadat (Na₃VO₄) in deionisiertem/Milli‑Q-Wasser bei 0.2 M (200 mM)

Benötigte Materialien

• Festes Natriumorthovanadat (Na₃VO₄)
• 6 M Salzsäure (HCl) oder 1 M HCl
• Deionisiertes / Milli‑Q-Wasser
• 50 mL-Schraubröhrchen zum Lösen und Mischen; hitzebeständiges Gefäß mit Druckausgleich, das vom Hersteller für die gewählte Heizmethode zugelassen ist
• Mikrowelle oder siedendes Wasserbad
• pH-Meter oder pH-Teststreifen zur Messung von pH 10
• Vollpipetten/Mikropipetten
• Persönliche Schutzausrüstung (Handschuhe, Schutzbrille, Laborkittel)

Durchführung

• Schritt 1
  **0.736 g** Natriumorthovanadat (Molekülmasse = 183.91) in ein 50 mL-Schraubröhrchen einwiegen. **15 mL** deionisiertes/Milli‑Q-Wasser zugeben und durch Umdrehen bis zur Auflösung mischen (≈ 5 min).
• Schritt 2
  Den pH der Lösung mit 6 M HCl auf **10.0** einstellen (unter Mischen tropfenweise jeweils ~10 µL zugeben). Der pH vor der Einstellung kann ~13.5 betragen und die Lösung kann sich bei Säurezugabe gelb färben.
• Schritt 3
  Vor dem Erhitzen sicherstellen, dass das Gefäß für die gewählte Heizmethode geeignet ist und sein Verschluss entfernt oder gelockert ist, damit Druck entweichen kann; die Lösung bei Bedarf in ein geeignetes Gefäß überführen. Ein fest verschlossenes Röhrchen nicht erhitzen. In einem siedenden Wasserbad erhitzen, bis die Lösung farblos wird, dann auf Raumtemperatur abkühlen lassen. Mikrowellenerwärmung nur mit einem ausdrücklich dafür zugelassenen Gefäß und einem validierten Laborverfahren verwenden.
• Schritt 4
  Nach dem Abkühlen den pH erneut auf **10.0** einstellen und den Koch-/Abkühlzyklus wiederholen. **2–3 Zyklen** durchführen, bis die Lösung nach dem Abkühlen farblos und bei pH 10 stabil bleibt.
• Schritt 5
  Mit deionisiertem/Milli‑Q-Wasser auf **20 mL** Endvolumen einstellen und durch Umdrehen mischen.

Hinweis: Wiederholte pH-Einstellung und Kochzyklen beseitigen polymere Vanadatspezies und ergeben eine aktive, farblose Orthovanadat-Stammlösung. Aliquots mit Konzentration und Aktivierungsdatum beschriften und in kleinen Volumina (z. B. 0.5–1 mL) bei **–20 °C** lagern. Bei erneuter Färbung oder pH-Änderung verwerfen.

Verfügbare Reagenzien