Preparación del tampón de carga SDS-PAGE
Esta guía describe la preparación de un tampón de carga para SDS-PAGE a una molaridad definida para uso en laboratorio.
El tampón de carga para SDS-PAGE (tampón de muestra) se utiliza para preparar muestras de proteínas para la electroforesis desnaturalizante en gel de poliacrilamida, proporcionando desnaturalización, densidad y un colorante de seguimiento.
Tampón de carga para SDS-PAGE – Composición de la solución de trabajo 1X
| Nombre | Fórmula | Concentración (1X) | CAS |
|---|---|---|---|
| Tris-Cl (pH 6.8) | C₄H₁₁NO₃ | 50 mM | 77-86-1 |
| SDS | C₁₂H₂₅O₄NaS | 2% (w/v) | 151-21-3 |
| Azul de bromofenol | C₁₉H₁₀Br₄O₅S | 0.1% (w/v) | 115-39-9 |
| Glicerina | C₃H₈O₃ | 10% (v/v) | 56-81-5 |
| β-Mercaptoetanol (añadir antes de usar) | C₂H₆OS | 1% (v/v) | 60-24-2 |
Aplicaciones del tampón de carga para SDS-PAGE
El tampón de carga para SDS-PAGE se utiliza para desnaturalizar proteínas, conferirles una carga negativa uniforme, aumentar la densidad de la muestra para la carga y permitir el seguimiento visual del avance de la electroforesis desnaturalizante en gel de poliacrilamida.
Consejos de preparación, esterilización y almacenamiento
- La cantidad necesaria de agente reductor puede añadirse durante la preparación y la solución almacenarse a −20°C, pero la pérdida de actividad con el tiempo puede causar bandas fantasma.
- Para SDS-PAGE en condiciones reductoras, se recomienda añadir β-mercaptoetanol antes del uso a una concentración final de 1% (v/v). El tampón suele ser estable durante aproximadamente un mes después de la adición.
- El β-mercaptoetanol es tóxico y tiene un olor fuerte; utilizar protección adecuada.
- Pueden utilizarse formulaciones alternativas, como sustituir el β-mercaptoetanol al 1% (v/v) por DTT a 100 mM.
- El SDS puede formar precipitados floculentos a bajas temperaturas; asegurar su disolución completa antes del uso.
- Esterilización: generalmente no es necesaria; decidir según las necesidades.
- Almacenamiento: temperatura ambiente; si el agente reductor se añade previamente, almacenar las alícuotas a −20°C.
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