Preparación del tampón de transferencia Tris-glicina
Esta guía describe la preparación de un tampón de transferencia Tris-glicina a una molaridad definida para uso en laboratorio.
El tampón de transferencia Tris-glicina se utiliza habitualmente para transferir proteínas en Western blot.
Tampón de transferencia Tris-glicina – Composición
| Nombre | Fórmula | Concentración | CAS |
|---|---|---|---|
| Tris base | C₄H₁₁NO₃ | 25 mM | 77-86-1 |
| Glicina | NH₂CH₂COOH | 192 mM | 56-40-6 |
| Metanol | CH₃OH | 20% (v/v) | 67-56-1 |
Esterilización y conservación
- Esterilización: normalmente no es necesaria, opcional
- Conservación: temperatura ambiente
Consejos
- El pH de la solución debe ser 8.3 y no requiere ajuste.
- A una concentración 1X, la solución debe contener 20% (v/v) de metanol, ajustable según el tamaño de la proteína; añadir la cantidad correspondiente.
- Para proteínas grandes, aumentar la cantidad de SDS (concentración de trabajo habitual: 0.025–0.1% w/v) y reducir el metanol; para proteínas pequeñas, hacer lo contrario.
- Puede producirse cristalización al conservar el concentrado 10X a temperaturas ambientales bajas. Calentar en un baño de agua a 37°C hasta disolverlo completamente antes de diluir y utilizar.
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