RIPA 용해 버퍼(방사면역침전 분석 버퍼)는 세포/조직에서 총 단백질을 추출할 때 널리 사용되는 용해 버퍼입니다. 막, 세포질, 핵 단백질을 포함한 다양한 단백질 추출에 적합하며, 이온성/비이온성 계면활성제 혼합으로 항원 에피토프를 비교적 잘 보존하면서 단백질을 효율적으로 가용화합니다. 웨스턴 블롯 및 면역침강 같은 후속 분석에 적합합니다.
RIPA 용해 버퍼 - 조성
| 성분명 | 화학식 | 농도 | CAS |
|---|---|---|---|
| Tris‑Cl (pH 7.4) | C₄H₁₁NO₃ | 50 mM | 77‑86‑1 |
| 염화나트륨 | NaCl | 150 mM | 7647‑14‑5 |
| NP‑40 | (C₂H₄O)nC₁₄H₂₂O | 1% (v/v) | 26027‑38‑3 |
| SDS(선택) | C₁₂H₂₅O₄NaS | 0.1% (w/v) | 151‑21‑3 |
| 디옥시콜산나트륨 | C₂₄H₃₉NaO₄ | 0.5% (w/v) | 302‑95‑4 |
| EDTA(선택) | C₁₀H₁₆N₂O₈ | 1 mM | 60‑00‑4 |
멸균 및 보관
- 멸균: 일반적으로 필요하지 않습니다. 계면활성제가 포함된 버퍼는 필요 시 0.22 μm 여과를 적용하며, 계면활성제나 EDTA의 분해를 피하기 위해 오토클레이브는 권장하지 않습니다.
- 보관: 실온 또는 4°C. 사용 중인 작업용 소분액은 얼음 위에 두세요.
주의사항 및 참고
- 단백질 분해를 막기 위해 사용 직전에 단백질분해효소/인산화효소 저해제(예: 아프로티닌, 류펩틴, 펩스타틴, PMSF, Na₃VO₄, NaF)를 추가하세요. PMSF는 수용액에서 불안정하므로 반드시 직전에 넣어야 합니다.
- 일부 조성에서는 NP‑40 대신 Triton X‑100을 사용할 수 있습니다.
- 단백질-단백질 상호작용 보존이 중요한 경우, 더 순한 버퍼 또는 이온성 계면활성제가 없는 버퍼를 고려하세요.
- 디옥시콜산나트륨 농도는 세포 종류와 필요한 용해 강도에 따라(일반적으로 0.1-1%) 조절할 수 있습니다.
- 단백질 분해와 변성을 최소화하기 위해 모든 용해 단계는 얼음 위 또는 4°C에서 수행하세요.
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