RIPA溶解バッファー（Radio Immuno Precipitation Assay buffer）は、膜・細胞質・核タンパク質を含む 総タンパク質抽出に広く使われる細胞／組織溶解バッファーです。イオン性・非イオン性界面活性剤の混合により タンパク質を効率的に可溶化し、Western blotや免疫沈降など下流解析のための抗原エピトープを多く保持します。
RIPA溶解バッファー — 組成
| 名称 | 化学式 | 濃度 | CAS |
|---|---|---|---|
| Tris‑Cl (pH 7.4) | C₄H₁₁NO₃ | 50 mM | 77‑86‑1 |
| 塩化ナトリウム | NaCl | 150 mM | 7647‑14‑5 |
| NP‑40 | (C₂H₄O)nC₁₄H₂₂O | 1% (v/v) | 26027‑38‑3 |
| SDS（任意） | C₁₂H₂₅O₄NaS | 0.1% (w/v) | 151‑21‑3 |
| デオキシコール酸ナトリウム | C₂₄H₃₉NaO₄ | 0.5% (w/v) | 302‑95‑4 |
| EDTA（任意） | C₁₀H₁₆N₂O₈ | 1 mM | 60‑00‑4 |
滅菌と保存
- 滅菌：通常不要。界面活性剤を含むバッファーは必要に応じて0.22 μmろ過するが、界面活性剤やEDTAの劣化を避けるためオートクレーブはしません。
- 保存：室温または4°C。使用時は作業アリコートを氷上で保持してください。
ポイントと注意
- タンパク質分解を防ぐため、使用直前にプロテアーゼ阻害剤・ホスファターゼ阻害剤（例：アプロチニン、ロイペプチン、ペプスタチン、PMSF、Na₃VO₄、NaF）を添加してください。PMSFは水溶液で不安定なため直前添加が必要です。
- 一部の処方ではNP‑40の代替としてTriton X‑100を使用できます。
- タンパク質間相互作用を保持したい場合は、より穏やか、または非イオン性界面活性剤のみのバッファーを検討してください。
- デオキシコール酸ナトリウム濃度は細胞種や必要な溶解強度に応じて調整（通常0.1〜1%）できます。
- タンパク質分解や変性を最小限にするため、溶解操作は氷上または4°Cで行ってください。
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