Herstellung einer Biotin (in PBS)-Stammlösung

Anleitung zur Herstellung einer Stammlösung – Biotin in PBS

Biotin (Vitamin B7) ist ein wasserlösliches Vitamin, das in neutralem Wasser nur wenig löslich ist, sich jedoch in warmen oder alkalischen Lösungen leichter löst. Eine 1 mM Biotin-Stammlösung kann in phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS) für biochemische Assays und Zellkulturzusätze hergestellt werden.

Ziel

Herstellung von 10 mL einer 1 mM Biotin-Stammlösung in PBS.

Zusammensetzung

• 1 mM Biotin (C₁₀H₁₆N₂O₃S) in PBS

Benötigte Materialien

• Biotin (molare Masse 244.31 g/mol)
• Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS)
• 1 N NaOH (optional, zur Unterstützung der Auflösung)
• Deionisiertes / destilliertes Wasser
• 15 mL Röhrchen mit Graduierung und Schraubverschluss
• Vortexmischer oder Röhrchenrotator
• Spritzenfilter (0.22 µm) zur Sterilisation
• Persönliche Schutzausrüstung (Handschuhe, Schutzbrille, Laborkittel)

Vorgehensweise

• Schritt 1
  **2.44 mg** Biotin abwiegen (für 10 mL einer 1 mM Stammlösung). Den Feststoff in ein graduiertes 15 mL Röhrchen überführen.
• Schritt 2
  **9 mL PBS** zugeben und zum Auflösen mischen (Vortex oder Rotation). Bei Bedarf einige Tropfen 1 N NaOH zur Unterstützung der Biotinauflösung zugeben; nicht ausschließlich in reinem Wasser lösen.
• Schritt 3
  Das Lösungsvolumen mit deionisiertem Wasser auf **10 mL** einstellen. Erneut mischen.
• Schritt 4
  Unter aseptischen Bedingungen durch einen **0.22 µm Spritzenfilter** in ein steriles Gefäß filtrieren und so sterilisieren.

Lagerung: Aseptisch in kleine Volumina aliquotieren (z. B. 0.5 mL oder 1 mL). Bis zur Verwendung bei **–20 °C** lagern, um die Stabilität zu erhalten.

Verfügbare Reagenzien