硫酸アンモニウム系PCRバッファーの調製

硫酸アンモニウムPCRバッファーは、プライマー特異性の向上とDNAポリメラーゼ活性の最適化に一般的に使用されます。

硫酸アンモニウムPCRバッファー — 組成

滅菌と保存

• 滅菌：0.22 μmろ過。
• 保存：分注して−20°Cで保存。

ポイント

• バッファーpHは通常8.0〜9.5で、Tris-Clで調整します。
• Triton X-100は粘度が高いため、低濃度ストックを使用するかTween 20で代替します。
• 硫酸アンモニウム使用時はMgCl₂濃度が高め（2.0 ± 0.5 mM）になることが多いです。
• NH₄⁺とMg²⁺は拮抗的に作用し、硫酸アンモニウムを含むバッファーはMg²⁺範囲にわたり高いプライマー特異性を示します。
• アンモニウムイオンはミスマッチしたプライマー‐鋳型の水素結合を不安定化し、反応特異性を高めます。
• 最適なPCRバッファーはDNAポリメラーゼの種類に依存するため、供給元の推奨に従ってください。
• 無水MgCl₂の直接使用は発熱するため、溶媒の一部に少量ずつ加えてください。